Analýza tvorby endogénnych DNA opravných fokusov a ROS V PFG+/- HSPC bunkách
| Authors: |
Dominika Kochanová 1
Matúš Durdík 1
Pavol Košík 1
Eva Marková 1
Igor Belyaev 1
1 Ústav experimentálnej onkológie BMC SAV, Bratislava, Slovenská republika |
|---|---|
| Year: | 2020 |
| Section: | Cellular metabolism, physiology, molecular biology and genetics |
| Abstract No.: | 2020 |
| ISBN: | 978-80-972360-6-9 |
Leukémia je považovaná za jedno z najčastejších heterogénnych ochorení u detí do 15 rokov. Táto skupina život ohrozujúcich chorôb je spôsobená neregulovaným delením nezrelých hematopoetických a progenitorových buniek (HSPC). Ich charakteristickým znakom je prítomnosť transmembránového markeru - fosfoglykoproteínu CD34. Podľa súčasnej teórie dvoch zásahov je na jej vznik potrebných viacero mutačných udalostí. Zatiaľ čo prvou in utero genetickou zmenou vznikne preleukemický fúzny gén (PFG), pre začiatok samotného ochorenia je potrebný ďalší zásah vytvorený až po narodení jedinca. Dôvodom vzniku PFG sú chromozomálne translokácie, ktoré sú podmienené prítomnosťou pre bunku najhorších poškodení, dvojvláknových zlomov (DSB). Tvorba DSB v organizme môže nastať vplyvom endogénnych (reaktívnych foriem kyslíka – ROS) alebo exogénnych (chemikálie, ionizujúce žiarenie) faktorov.
Cieľom našej práce bolo zistiť či má prítomnosť PFG vplyv na tvorbu endogénnych ROS a to pomocou flourescenčnej farbičky CellRoxGreen, ktorá má schopnosť vytvárať florescenčný signál v prítomnosti týchto molekúl. Sledovali sme aj tvorbu poškodení DNA, konkrétnejšie dvojvláknových zlomov, pomocou endogénnych DNA opravných fokusov γH2AX (γH2A histone family member X) a 53BP1 (p53 binding protein protein 1), čiže proteínov zapojených do signalizácie a opravy DNA poškodení. Taktiež sme sa zamerali na apoptózu buniek, ktorej markerom je γH2AX panstaning alebo γH2AX zafarbenie celého jadra.