Expresia alkoholdehydrogenázy vo Vibrio natriegens
| Authors: |
Kristína Macáková 1
Silvia Rybecká 1
Eva Struhárňanská 1
Monika Chovanová 1
Ľubica Kormanová 1
Viktor Varga 1
Zdenko Levarski 1,2
Stanislav Stuchlík 1,2
1 Univerzita Komenského v Bratislave, Prírodovedecká fakulta, Katedra molekulárnej biológie, Mlynská dolina , Ilkovičova 6, 842 15 Bratislava, Slovenská republika 2 Univerzita Komenského v Bratislave, Vedecký park, Ilkovičova 8, 841 04 Bratislava, Slovenská republika |
|---|---|
| Year: | 2019 |
| Section: | Cellular metabolism, physiology, molecular biology and genetics |
| Abstract No.: | 1806 |
| ISBN: | 978-80-972360-4-5 |
Vibrio natriegens je gramengatívna, nepatogénna baktéria, ktorá je charakteristická svojou rýchlou generačnou dobou,< 10 min a vysokým obsahom ribozomálnej DNA. V našom experimente sme pracovali s komerčne dostupným kmeňom V. natriegenes s názvom VmaxTMExpress, ktorý je charakteristický deléciou niekoľkých génov extracelulárnych nukleáz a obsahom IPTG indukovateľnú T7-RNA polymerázovú kazetu [1]. Jedná sa o ľahko kultivovateľnú baktériu, na ktorú je možné aplikovať rovnaké techniky zaobchádzania ako v prípade E. coli. Uvedené vlastnosti by mohli viesť ku zníženiu časovej náročnosti a zefektívneniu ekonomických nárokov. Hlavným cieľom tejto práce je testovanie konkurencieschopnosti VmaxTMExpress ku doteraz využívanej E.coli a optimalizácia expresie ADH1 vo VmaxTM Express, nakoľko je ADH1 využívaná v rôznych farmaceutických aplikáciách, pri získavaní čistých enenatiomérnych foriem niektorých liečiv a taktiež pri produkcii šesťuhlikatých vonných alkoholov pre kozmetický a farmaceutický priemysel [2].
Pri práci sme pozorovali rýchlejší rast kultúry Vmax ako E. coli. Vďaka tomu sme previedli indukciu expresie už po 1,5 h (hustota kultúry OD600 = 0,5) od preočkovania nočnej kultúry do čerstvého média, pričom u E. coli to bolo možné až po 2,5 h. Expresiu sme analyzovali pomocou SDS-PAGE géloch. Expresia ADH1 v kmeni VmaxTM Expres, bola efektívnejšia nakoľko percentuálne zastúpenie proteínu ADH1 voči celkovému obsahu produkovaných proteínov bolo vyššie ako v prípade E. coli. Rýchlejší nárast biomasy Vmax oproti E. coli sme potvrdili aj analýzou hmotnosti sušiny kultúry v časových intervaloch. VmaxTM Express dosahuje až dvojnásobne lepšie výsledky ako E. coli. Ďalšími krokmi v našej práci je testovanie schopnosti produkcie ADH1 v kmeni VmaxTM Express v rôznych podmienkach ako je zloženie média a teplota rastu/ expresie.
[2] Zheng Y. G., Yi H. H., Yu D. F., et al. (2017) Appl Microbiol Biotechnol 101(3), p.987.