Expresia tyroidnej peroxidázy z Branchiostoma belcheri v Escherichia coli a jej optimalizácie
Authors: |
Gabriel Zorkócy 1
Monika Chovanová 1
Eva Struhárňanská 1
Silvia Rybecká 1
Zdenko Levarski 1,2
Stanislav Stuchlík 1,2
Marcel Zámocký 3
Ján Turňa 1,2
1 Univerzita Komenského v Bratislave, Prírodovedecká fakulta, Katedra molekulárnej biológie, Mlynská dolina, Ilkovičova 6, 842 15 Bratislava, Slovenská republika 2 Univerzita Komenského v Bratislave, Vedecký park, Ilkovičova 8, 842 15 Bratislava, Slovenská republika 3 Slovenská akadémia vied, Ústav molekulárnej biológie, Dúbravská cesta 21, 845 51 Bratislava, Slovenská republika |
---|---|
Year: | 2018 |
Section: | Open section for students |
Abstract No.: | 1753 |
ISBN: | 978-80-972360-2-1 |
Peroxidázy sú hémové proteíny katalyzujúce viaceré oxidoredukčné reakcie, napríklad redukciu peroxidu vodíka, či oxidáciu rozličných organických aj anorganických zlúčenín [1]. Peroxidázy nachádzajú uplatnenie v mnohých odvetviach priemyslu, ako sú napríklad elektrochemické biosenzory na báze peroxidáz, kde v spojení s enzýmom produkujúcim peroxid vodíka je možno detekovať rozličné látky [2-3], či odstraňovaním syntetických farbív oxidatívnym poškodením farebných zlúčenín [4].
Branchiostoma belcheri je kopijovec obsahujúci tyroidnú peroxidázu so sekvenciou, ktorá vykazuje homológiu s ľudskou [5] a má potenciál byť vhodným enzýmom pre biotechnologické aplikácie. Cieľom tejto práce bola optimalizácia produkcie tyroidnej peroxidázy z Branchiostoma belcheri v Escherichia coli z hľadiska výťažku, a zároveň čo najvyššieho podielu solubilného rekombinantného proteínu.
V práci sme testovali viacero kmeňov E. coli, ktoré boli transformované plazmidom obsahujúcim syntetický gén pre peroxidázu s optimalizovanými kodónmi pre E. coli. Bunky sme kultivovali v troch typoch média a pri troch rôznych teplotách kultivácie pre optimalizáciu produkcie enzýmu. Expresia proteínu bola dosiahnutá u všetkých kmeňov pri dvoch teplotách a dvoch typoch média. Avšak majoritný podiel proteínu bol produkovaný insolubilný, vo forme tzv. inklúznych teliesok. Preto budú nutné ďalšie experimenty s použitím postupov, pri ktorých je možno dosiahnuť solubilný enzým.
[2] Jia J., Wong B., Wu A., et al. (2002) Anal. Chem. 74, p. 2217-2223.
[3] Ruzgas T., Csoregi E., Katakis I., et al. (1996) J. Mol. Recognit. 9, p. 480-484.
[4] Shin K S, Kim C J (1998) Biotechnol. Lett. 20, 569-572.
[5] Ogasawara M. (2000) Dev. Genes. Evol. 210, p. 231-242.