Vplyv dlhodobej kultivácie na vlastnosti mezenchýmových kmeňových buniek
| Authors: |
Lenka Oravcová 1,2
Zuzana Varchulová Nováková 2
Marcela Kuniaková 2
Mária Csöbönyeiová 1
Ľuboš Danišovič 2
1 Ústav histológie a embryológie LF UK, Bratislava 2 Ústav lekárskej biológie, genetiky a klinickej genetiky LF UK a UN, Bratislava |
|---|---|
| Year: | 2014 |
| Section: | Cellular metabolism, physiology, molecular biology and genetics |
| Abstract No.: | 1045 |
| ISBN: | 978-80-970712-6-4 |
Mezenchýmové kmeňové bunky (MKB) sú primitívne nediferencované bunky so schopnosťou terminálne sa diferencovať na iné typy buniek. Majú potenciál dlhodobej samoobnovy a sú schopné aktívne migrovať do poškodených častí organizmu, čím sa podieľajú na regeneračných procesoch [1]. MKB predstavujú dospelé kmeňové bunky, ktoré je možné jednoducho izolovať napríklad z tkaniva kostnej drene, z tukového tkaniva, z Whartonovho rôsolu, či zo zubnej drene. Pre tieto svoje vlastnosti by mohli byť vhodným nástrojom pre tkanivové inžinierstvo a regeneratívnu medicínu. Nakoľko MKB predstavujú zriedkavú populáciu buniek, ktorých koncentrácia v tkanivách je veľmi nízka (0,001-0,01% buniek kostnej drene, 1% buniek tukového tkaniva), pred ich použitím v klinickej praxi je potrebné získať ich dostatočné množstvo expanziou v in vitro podmienkach. Hoci doposiaľ nebol stanovený protokol na kultiváciu nediferencovaných MKB, existuje veľká škála metodických možností izolácie a in vitro kultivácie kmeňových buniek, ktorých výsledkom je získanie dostatočného množstva buniek na potenciálnu klinickú aplikáciu. Avšak treba brať do úvahy riziká, ktoré so sebou prináša manipulácia s kmeňovými bunkami mimo organizmu, predovšetkým zmeny, ktoré vedú k ich malígnej transformácii [2].
Cieľom projektu je štúdium vplyvu dlhodobej kultivácie na vlastnosti MKB. Bunky budú izolované z tukového tkaniva a kultivované za štandardných podmienok v CO2 inkubátore. Počas kultivácie bude priebežne vykonávaná kontrola morfológie MKB – analýzy svetelno- a elektrónmikroskopické. Metódou prietokovej cytometrie bude sledovaný vplyv dlhodobej kultivácie na expresiu povrchových markerov kmeňových buniek (konkrétne CD14, CD20, CD34, CD45, CD73, CD90, CD105 a CD133) a telomerázová aktivita MKB. V rámci génovej expresie sa zameriame na expresiu génov súvisiacich s ich možnou malígnou transformáciou. Analýza našich výsledkov by mohla priniesť nové poznatky o vlastnostiach MKB a ich bezpečného využitia v humánnej medicíne.
[2] Duailibi, M.T., et al., 2012. Cytogenetic instability of dental pulp stem cell lines. J. Mol. Histol. 43(1):89-94.